高效液相色谱仪测定固体废物中草甘膦的含量
一、原理
水样过滤后，用阳离子交换柱进行高效液相色谱仪等度分析。在 65°C 下，被测物用次氯酸钙氧化，其产物氨基乙酸（glycine）用含有 2-巯基乙醇的邻苯二甲醛在 38°C 进行反应，得到有荧光相应的物质。荧光检测的激发波长为 340 nm，发射波长为>455 nm。
二、试剂和材料
2.1.2 试剂水，高纯水
2.1.3 取 0.005 M KHPO 4 (0.68 gm)溶于 960ml 试剂水中，加入 40ml 高效液相色谱仪级甲醇，用浓磷酸将 pH 调至1.9。混匀后用 0.22µm 过滤膜过滤并脱气。
2.2 柱后衍生溶液
2.2.1 次氯酸钙溶液，取 1.36gKHPO 4 , 11.6gNaCl 和 0.4gNaOH 溶于 500ml 去离子水中。加入将 15mgCa(ClO) 2 溶于 50ml 去离子水的溶液。将溶液用去离子水稀释至 1000ml。用 0.22µm 膜过滤备用。建议该溶液每天新鲜配制。
2.2.2 邻苯二甲醛(OPA)反应液
2.2.2.1 将 10ml2-巯基乙醇和 10ml 乙腈以 1：1 比例混合。密封储存在通风橱中。
2.2.2.2 硼酸钠（0.025mol/L），将 19.1g 硼酸钠（Na 2 B 4 O 7 ·10 H 2 O) 溶于 1.0L 试剂水中。如果在使用前一天配制，硼酸钠在室温下会完全溶解。
2.2.2.3 OPA 反应液，将 100±10mg 邻苯二甲醛（OPA）（熔点：55-58℃）溶于 10ml 甲醇中。加入1.0L0.025mol/L 硼酸钠溶液。混匀，用 0.45µ 膜过滤后，脱气。加入 10µl2-巯基乙醇溶液并混匀。除非能够隔绝氧气保存，否则此溶液应该每天新鲜配制。溶液在空气中低温(4℃)保存两周没有明显增加的荧光本底噪音；如果在氮气保护条件下可长期保存。亦可以买到商品化的荧光醛。
2.3 样品保护试剂：硫代硫酸钠，颗粒，分析纯。
2.4 标准储备液，1.00µg/ml，准确称取 0.1000g 纯草甘膦，溶于 1000ml 去离子水中。
三、仪器和设备
3.1 高效液相色谱仪，具有荧光检测器，200µl 定量环。
3.2 色谱柱，250×4 mm, 钾型阳离子交换柱，在 pH = 1.9，65℃下填装。
3.3 保护柱，C18 填料，或者与色谱柱填料相近的保护柱。
3.4 柱温箱。
3.5 柱后反应装置，包括两个柱后衍生泵，一个三通，两个 1.0ml 特富龙材质延迟管线（控温在 38℃）。
四、分析步骤
4.1 样品净化，高效液相色谱仪方法直接用水溶液进样，样品净化步骤仅涉及过滤。自来水、地下水和市政污水用过滤方法处理亦未发现明显的干扰。如果特殊情况下需要其它的净化步骤，需要符合本方法指定的回收率要求。
4.2 分析条件
4.2.1 高效液相色谱仪分析
色谱柱： 250×4 mm, 阳离子交换柱，柱温：65℃；
流动相：0.005 M KHPO4-水-甲醇(24：1)，pH = 1.9；
流速：0.5ml/min；
进样体积：200µl；
检测：激发波长：340nm，发射波长：455nm。
4.2.2 柱后衍生条件
次氯酸钙溶液流速：0.5ml/min；
OPA 溶液流速：0.5ml/min；
反应温度：38℃。
五、结果计算
样品中草甘膦的浓度（µg/L）以下式计算：
式中：A——样品中草甘膦的峰面积；RF——从校正数据得到的相应因子。
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